电子维氏硬度计下环状寡聚体结构类似于天然内质网膜 以碘离子为疏水性碰撞荧光猝灭剂,证实新生肽在转运过程中经过一个穿过膜的水孔。碘离子位于内质网膜腔一侧,而不是胞质一侧,因此可以碰撞到并猝灭位于膜胞质一侧核糖体内的荧光染料。这个结果表明,存在一条水质通道使腔内的碘离子可以完全通过内质网膜并扩散进入核糖体。碰撞猝灭实验还证明,核糖体中的水质新生肽链通道和内质网膜中的水质孔在核糖体结合到膜上的都被封闭与胞质隔绝。荧光实验结果综合表明,新生肽链在转运过程中处于一种水质环境中,这种水质空间只与新生分泌蛋白的目的地内质网腔连通。近,利用电子维氏硬度计对纯化的膜蛋白进行观察,已发现一个水质转运孔的图像。一些在光交联研究中参与转运的蛋白质被纯化,发现它们形成了一种环状的寡聚体,结构类似于在电子维氏硬度计下观察到的天然内质网膜。随后用冰冻蚀刻全自动精密维氏硬度计技术得到的复合体与核糖体结合的照片证明,新生肽经过的水质孔与核糖体通道对齐。由未进行翻译时的核糖体和纯化的Sec61形成异源二聚复合体,利用冰冻蚀刻电子全自动精密维氏硬度计照片构建出此异源二聚复合体的三维结构。 与荧光实验得到的数据一致,核糖体与转运孔结合形成一个独立封闭的管道,这个管道从核糖体中蛋白质合成的位置到达分泌蛋白的目的地——内质网腔。 因此,在共翻译转运过程中,核糖体结合到内质网膜上的特定位点,它们是水孔穿越膜双分子层的地方。在蛋白质合成的过程中,新生多肽链通过这些孔穿过内质网膜进入到内质网腔。
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