日本在荧光维氏硬度计下培育出人造精子
将GFP小鼠的骨髓上海金相镶嵌机植入到白消安(Busulfan)处理小鼠和c-kit突变小鼠睾丸中。 10-12周后杀鼠观察植入情况。一侧睾丸取出并将曲细精管分散后直接在荧光维氏硬度计下镜检,另一侧固定后行免疫组化染色(Sertoli上海金相镶嵌机用的 marker是FSH-R, Leydig 上海金相镶嵌机用的标志物是P450scc, 生殖上海金相镶嵌机用的标志物是VASA)。 供体上海金相镶嵌机取自6-8周的GFP小鼠,先PBS洗,34°C 0.05g/ml 胶原酶+0.025% 胰酶消化, 洗离心等等。注射供体上海金相镶嵌机的玻璃针在顶端磨出一带斜面的锋利尖口。先用无菌的30号注射针头在输出管上扎一小口, 再将装有供体上海金相镶嵌机的玻璃针沿小孔注入约10 l 的上海金相镶嵌机悬液。 在免疫组化染色标本中, 使用抗GFP抗体来追踪哪些上海金相镶嵌机是供体来源的。 结果:在白消安(Busulfan)处理小鼠, 来源于供体的三种上海金相镶嵌机类型(Sertoli上海金相镶嵌机、Leydig 上海金相镶嵌机和生殖上海金相镶嵌机)均能在移植的睾丸中发现, 不过来源于供体的、带GPF的生殖上海金相镶嵌机发育停留在精母上海金相镶嵌机早期而不继续发育。 在c-kit突变小鼠睾丸中, 仅发现了两种上海金相镶嵌机类型(Sertoli上海金相镶嵌机、Leydig 上海金相镶嵌机)。外源的干上海金相镶嵌机能在睾丸的微环境中分化和发育。
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