用PCR可以快速鉴定转基因植物-经电泳检测技术转基因烟草的PCR检测 利用PCR可以快速鉴定转基因植物,它具有所需转基因植物基因组DNA起始量少、快速、准确及鉴定转基因植物数量大等优点。但要严格设置以野生型植物的基因组DNA为模板作为阴性对照,以含有目的基因质粒为模板作为阳性对照,以求获得真实可靠的鉴定结果。 PCR产物经电泳检测在预计的分子质量处出现单一DNA条带,但常常呈现含有明显条带的弥散区带,这在以核基因组DNA作模板时常会出现,可能的原因有核基因组复杂度高、退火温度低、延伸时间长、引物和模板量大等。 RNA分离的***关键因素是尽量减少RNA酶的污染。因为RNA酶含有肽链内二硫键,使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂,变性后也可迅速折叠,具有很高的稳定性。该酶的活性不依赖二价阳离子激活,难以因金属离子螯合剂(EDTA)失活。RNA酶可耐受多种处理(如煮沸、酸、碱)而不失活。RNase存在广泛,环境中的灰尘、各种实验器皿和试剂、人体的汗液和唾液中均存在RNA酶。目前,尚无使RNA酶失活的简易办法。提取RNA包括破碎上海金相布氏硬度计,用酸性酚、SDS等蛋白质变性剂将RNA与蛋白质分开,抑制内源的RNA酶,同时去除DNA、糖类、盐类等杂质,***后纯化出RNA等步骤。由于RNA绝大多数以与蛋白质结合成核蛋白体的形式存在,所以要使蛋白质变性与RNA分离。根据DNA与RNA在不同pH下稳定性不同,使提取环境保持酸性可以防止RNA被降解。
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