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细胞内物质运输系统研究用硬度计出售! (一) 利用免疫染色法,了解细胞内胞器分布的情形: 主要的原理是利用抗原和抗体之间有专一的结合特性,以及已知的标定分子,利用硬度计观察蛋白质所在的位置。例如,Hochest 33258这种会与DNA结合的萤光物质,受激发后,发出蓝光,因此可用来指示细胞核所在的位置。而Golgin-245这种已被研究出是位在高基氏体的蛋白质,它可以利用专一性的一级抗体辨识后,再以会激发出萤光的二级抗体结合,则由萤光讯号处得知高基氏体所在的位置。 (二) 探讨蛋白质在细胞内的分布情形: 蛋白质执行生物功能时,如外释作用,必须经由蛋白质运输系统,将它送到特定的细胞部位,而外来的大分子也可经由内胞作用(请见附图三)进入细胞。例如,以萤光标定的霍乱毒素次单元B (Cholera Toxin subunit-B;CTB-594nm) 和运铁蛋白质 (Transferrin;Tf-488nm),各标定30分钟后,见其被送至高基氏体处,了解细胞外的分子是透过内胞作用由细胞膜运送至高基氏体。并利用VSVG-GFP这种病毒醣蛋白质与绿色萤光蛋白质结合的分子,在细胞内合成后,会经由内质网运送至高基氏体,再运送至细胞膜,藉此了解外释作用。 (三) 观察蛋白质运输路径的调节: 使用一种会调控囊泡运输的特殊蛋白质分子ARL1﹝它是一种小分子GTP结合蛋白酶,ADP-ribosylation factor-like蛋白质(简称ARL)﹞,来观察ARL1对于VSVG-GFP以及CT-B运输过程的调节作用。例如,若以细胞转染的方法,让细胞同时大量表现出ARL1 突变株 (ARL1QL)、VSVG-GFP,则会使VSVG-GFP无法顺利送至细胞膜上,而堆积在高基氏体内。


 
 
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