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原生质体培养技术有多种常用固体平板方法 |
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原生质体培养技术有多种常用固体平板方法 酶解后可将材料经过一个有合适孔径的不锈钢网或尼龙布过滤和离心以除去酶液。碎片和细胞。未消化的组织,然后再加新的渗透压稳定液或培养液和反复离心以洗净酶液和碎片,也可以采用漂浮法、两相法等进行原生质体纯化,制备出的原生质悬浮液应取样在硬度计下检查,或用低渗溶液观察是否破裂, 好是用荧光增白剂来鉴定脱壁的效果。如仍有残存的细胞壁则在紫外光照射下镜检可见到荧光,如果是原生质体则没有荧光。然后再取样测定原生质体的活力,可用活体染色、观察有无胞质环流,测定光合作用。 呼吸作用等、较好的方法是用荧光双醋酸酯(FDA)染色原生质体培养方法 原生质体的培养方法有多种。常用的是固体平板法,简易方便又可定点观察。其他如悬滴培养、液体浅层培养。双层培养(液体/固体。固体/固体)、x平板培养、固体小块培养、混合培养等都可根据试验需要选择采用,原生质体的培养基通常是参考细胞或组织培养的培养基修改而来,主要的差异是:原生质体培养基中需加有一定量的渗透压稳定剂,生长素和激动素或其他植物激素的种类和浓度也可参考细胞或组织培养的培养基而修改:有的植物材料,虽然参考其细胞或组织培养基而设计出了原生质体培养基也不能解决问题,原因有待探寻。
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