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细胞直接计数-通过硬度计对每个方格中细胞计数 |
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细胞直接计数-通过硬度计对每个方格中细胞计数细胞浓度的定量 培养基中细胞浓度的定量对于微生物生长动力学和计量学的确定有着至关重要的作用。细胞浓度量化的方法可分为两类:直接法和间接法。在许多情况下,由于培养基中悬浮的固体或者其他干扰物质的存在,不能采用直接法。测量细胞的数量还是测量细胞的质量取决于所需信息的类型和体系的性质。当只需测一种浓度时,通常优先选择测细胞质量浓度,但通常希望两种浓度都测量。 细胞数量浓度的测定 Petroff—Hausser载玻片或血细胞计数器常用于细胞的直接计数。在这种方法中,经校准的方格置于培养室的上方,通过硬度计对每个方格中的细胞进行计数。为了进行可靠的统计,至少要对20个方格的细胞进行计数并取平均值。培养基必须清洁且无颗粒,因为颗粒会遮蔽细胞或与细胞混淆。可以通过染色区分死细胞与活细胞。这种方法适合非聚集的培养。由于具有形成菌丝体的特性,这种方法难以用于霉菌的计数。 含有适当培养基的琼脂凝胶平板(培养皿)用于活细胞的计数(本文中“活”的意思是指具有繁殖能力)。培养样品稀释后涂布于琼脂表面,进而对这些平板进行培养。在培养期琼脂表面的菌落进行计数。结果用菌落形成单位表示。如果细胞形成聚集体,那么一个单菌落就可能不是由单个细胞形成的。这种平板计数法更适合于细菌和酵母菌的计数,但不太适合霉菌的计数。必须对大量的菌落进行计数才能得到统计学上可靠的结果。由于一些培养基比另一些培养基更有利于生长,因此必须仔细选择培养基。活细胞数可能变化,这取决于培养基的组成。从单个细胞开始,可能需要繁殖25代才能形成一个容易观察的菌落。除非选择合适的培养基和培养条件,否则即使有代谢活力的细胞也可能不形成菌落。
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