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固定体积培养介质细胞悬浮培养实验图像硬度计 |
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固定体积培养介质细胞悬浮培养实验图像硬度计 悬浮培养的类型 分批培养 分批培养指在固定体积的培养介质中进行的细胞悬浮培养。在培养过程中?细胞分裂和细胞生长使得悬浮培养物的生物量不断增加。当培养环境(可利用的营养和氧气)中出现限制因子时,细胞停止生长,生物量便不再增加。 培养时间的模式曲线 ①滞后期:此期为细胞分裂做准备。 ②指数期:细胞分裂速度快。 ③线形期:细胞分裂速度减慢,细胞伸长生长速度增加。 ④减速期:细胞分裂和细胞伸长速率都减小。 ⑤稳定期:细胞数目和大小保持恒定。 当细胞被转移到新鲜培养基中开始培养时,细胞就处于滞后期,这是分批培养的开始阶段,此时期的细胞还没有分裂。滞后期的细胞可用来分析特定代谢物的合成和某种生理活动的速率。紧跟滞后期的是细胞分裂期(即指数期),此时期持续的时间很短,指数期时,每单位生物量浓度的生物量增加是一定的且是可以测量的。生物量通常是指每毫升培养物中的细胞数目。一般地,在细胞分裂到3—4代后,细胞生长开始降低,后,细胞数目达到稳定期,此时细胞干重开始下降。稳定期是分批培养中细胞生长周期的后阶段,此时生物量和细胞数量都没见有明显的增加。培养时可以通过频繁(周期为2—3d)地进行亚培养而使细胞维持在指数生长期。由于细胞能利用胞内的储备物和死亡细胞所释放的可再利用代谢物,所以细胞可以存活几天。稳定期细胞的稳定性取决于生长限制因子的种类和特点(如因氮缺乏而达稳定期的细胞的存活时间比碳缺乏的要长)。处于稳定期的细胞被转移人新的培养基进行继代培养后,细胞就依次通过滞后期、很短暂的指数生长期、相对生长速率下降时期,接着又再次进入稳定期。进入末期前,细胞的体积在增大。一般按照惯例,每次继代培养都是开始于相对较高的细胞密度,所以再次进入稳定期前,细胞只进行有限的分裂(细胞数目加倍)。 一般来说,细胞悬浮培养的目的是获得生长速率较快、均一的细胞,而且所有细胞都是活的。在适当的培养基中频繁地进行继代培养,获得的细胞就可以同时具有这些特点。如果悬浮培养的细胞是用于做实验,则继代培养的时间间隔不要超过一周。
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