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| 菌落中有不同株系的真菌-原生质体分离技术 |
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菌落中有不同株系的真菌-原生质体分离技术单菌丝和单孢子分离 一般的分离方法不能排除菌落中有不同株系的真菌存在，在进一步研究真菌的遗传性、变异性、准性生殖等现象及菌株的精确生理指标时，有必要要求菌种由单孢子或单菌丝繁殖而来。 稀释挑取法用2mL注射器及4号或5号注射针头，将针尖用三角锉锉平，使滴下的水滴大小不超过80一150倍低倍镜的视野，这样改装的注射器即为单孢子分离注射器。以无菌的这种注射器吸取制备好的真菌孢子悬液，使其孢子的浓度在每滴有。一2个孢子的范围内，把悬液滴在无菌的载玻片上，镜检确系只有1个孢子后，再接种于培养平皿中培养。也可将悬液滴在水琼脂平皿中，滴下的位置用记号笔标出，然后镜检，确系是单孢子后，再用切取器将带有小块孢子的琼脂切下，移置到培养基中培养。切取器可用钢丝、铂丝或镍铬合金丝制成，先将金属丝打扁，弯成直径2mm的小环，或弯成扁平的钩，以便挑起移植切下的琼脂小块。 2．单菌丝分离法 在研究中有时需要切割菌丝体，进行单菌丝分离。单菌丝分离方法是将真菌移植在清洁的水琼脂平板(15—209琼脂，水1 000ml，高压灭菌)上，培养后在立体硬度计下寻找单根伸长的菌丝，用磨得尖锐的接种针或接种钩，将菌丝先端连同琼脂一起切下，移接在培养基上培养。由于水琼脂缺乏营养，菌丝生长稀疏，易于寻找到单个的菌丝。 3．原生质体分离法 利用细胞壁分解酶裂解菌丝体或芽生孢子时，原生质体便会从菌丝顶端或待孢子细胞壁被消化后释放出来。多细胞真菌每个菌丝细胞释放一个原生质体或分裂为若干个。因而通过原生质体的分离及再生可以获得单细胞株系，或比单细胞还小的单核原生质体发育而来的株系。用这种方法可以一次获得大量的由原生质体单元而来的菌株，工作效率很高。 4．显微操作器分离法 显微操作器实质上是一种微调的机械手，用来代替人手的直接操作，进行细胞分离、解剖、注射、单孢子分离和茵丝切割等，有关原理和应用操作详见各仪器所附的说明书或专门文献。
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