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| 使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物-细胞实验 |
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使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物-细胞实验溶液的过滤除菌 许多用于细胞培养的溶液中含有一种或多种对热不稳定的成分(如抗生素)，或几种成分构成的体系(如磷酸盐缓冲体系)，如果将它们进行高压蒸汽消毒，则会生成有毒的沉淀物。因此，使用膜滤器对这些溶液进行冷消毒是普遍的方法。 0．2μm微孔滤膜适于一般情况灭菌；然而，一些环境应激细菌(如假单胞菌属SP．)及支原体就能够通过这类滤膜。为了能大限度地去除这些组织培养中常见的微生物污染，就要采用孔径为o．1灶m微孔滤膜过滤培养液和血清。滤膜制造商可提供不同类型的滤膜。就细胞培养而言，醋酸纤维素或硝酸纤维素滤膜通常用于过滤诸如培养液和缓冲液等液体。值得注意的是，在使用前应该用热的去离子水冲洗薄膜，清除其中可能引起细胞毒性的可溶性物质。尼龙膜含较少的表面活化剂或润湿剂等可溶性物质；聚乙烯磺酸膜中含少量的可溶性物质并很少与蛋白质结合。 预先除菌的、随时可用的一次性过滤系统省时省力，消除了早期过滤方法存在的隐患。过滤器范围广，从小(≤lOml)到大(≥20L)，体积不等。这种一次性的系统也适用于真空或正压过滤。许多生产商根据细胞培养的使用要求，设计出特殊的过滤系统：灭菌膜、滤套和接收瓶，并确保它们无细胞毒、无致热原。对于制备培养基，使用无细胞毒的醋酸／硝酸纤维素滤膜，或其他相似的滤膜，以及食品级硅管。 注意：所有程序均遵循无茵技术。 适于哺乳动物细胞的培养基 进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH和适当的渗透压。此外，培养的外环境，尤其隔水式COz培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的02和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的C02。目前普遍使用的培养基一般由两部分组成：基础营养和补充成分。它们的组成可有相当大的差别。无论怎样，完全培养基的这两组成分都是细胞存活和增殖所不可缺少的。 注意：用于细胞培养的所有溶液和培养液，均应使用反向渗透系统生产的纯净水配制；用后的培养器皿要用水冲洗，不要用消毒剂处理。 注意：所有与活细胞接触的试剂与器械一定要灭茵，同时采用相应的无菌技术。
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