|
|
|
|
| 细胞的裂解方法-细胞壁观察图像分析硬度计 |
| 本站文字和内容版权为上海研润光学硬度计硬度计制造厂所有http://www.yr1718.net;转载请注明出处 |
|
细胞的裂解方法-细胞壁观察图像分析硬度计 对于获得准确、有意义的分析数据而言，分离核酸的质量是至关重要的为了从复杂的基质如细胞裂解液中获得高纯度的核酸，要精心设计样品前处理过程。去除的典型杂质包括细胞碎片、小分子、蛋白、细胞液、糖类、失活的细胞核酸酶和不需要的核酸。早年人们曾经尝试将离心后的裂解液直接注射入色谱，但很快发现这样会降低色谱柱的性能，造成背景干扰，增大柱后压等。此外，背景中蛋白等物质不可逆的吸附，会改变色谱的选择性 细胞裂解方法 提取核酸的步是细胞裂解和核酸酶的灭活，二者可以同时进行；例如，单一的提取液可以包括溶解细胞膜所用的表面活性剂和灭活胞内酶所需的强离液盐： 裂解的过程取决于细胞壁的性质，因此在研究中需要了解细胞壁的组成和结构信息。例如，真菌主要有两种细胞壁，能够通过与特定染料的反应而得到辨认，这种染料是Christian Gμm于19世纪80年代发现的，被称为革兰氏染料，是一种结晶紫染料与碘的混合物。当加入革兰氏染料时，革兰氏阳性细胞被染成紫色，而革兰氏阴性细胞则变为红色。革兰氏阳性菌的细胞壁较厚(30～100nm)，而革兰氏阴性菌的细胞壁较簿(20～30nm)。约40％～80％的革兰氏阳性菌细胞壁是由·种坚硬而复杂的聚合物(肽聚糖)组成，见图8．2，是由短肽所连接的线性杂多糖，具有很高的交联度。冈此，革兰氏阳性菌的细胞壁(如化脓性链球菌)对于能水解肽链的青霉素及其衍生物和溶菌酶(一种在IliON和唾液中发现的酶)十分敏感。而革兰氏阴性菌(如大肠杆菌)的细胞壁有一种显著的层状外观，如图8．3所示，其内部由单层肽聚糖组成，外部则基本为含蛋白的脂双层在革兰氏阴性菌中，15％～20％的细胞壁由断续交联的肽聚糖组成，交联度决定了细胞壁的韧性。一般而言，革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌更难裂解，新细胞比老细胞更难裂解，而小细胞比大细胞更难以列解细胞的裂解有多种方法，但是没有哪一种方法能用于所有的生物源细胞。每一一种技术都有其优点和缺点，裂解方法的选择取决于细胞的特点、种类以及后续的心用。在细胞裂解中，也可以同时使川多种方法，如酶裂解法使用特定的酶作用于细胞壁，而可以破坏由脂双层构成的细胞质膜，需要同时使用能够溶解脂质的表面活性剂，选择一种裂解方法时，应既能有足够的破坏性达到裂解细胞的目的，则致破坏目标核酸的完整性。当提取超声破碎法 细胞超声破碎法是利用超声探针针尖的快速振动所产生的超声波，即空化作用对细胞进行破碎的方法。空化会在针尖附近形成高速的微小气泡流，气泡高速运动所产生的强剪切力将细胞破坏 这并不是一个瞬时的过程，细胞悬液需要超声处理数分钟以使细胞裂解至所需的程度。这种方法并不是初次细胞破碎时很好的选择，但对于原生质球的破碎和革兰氏阴性菌细胞膜内外层的分离而言十分有效。超声粉碎机在使用过程中通常会产生热量，冈此应该尽可能地将样品置于冰浴中。在微生物裂解中，悬液中按1：2的比例加入0．1～0．5mm直径的玻璃珠辅助超声破碎。超声过程中产生的自由基可以与大多数生物分子反应，可以使用半胱氨酸、二硫苏糖醇或其他含有一SH键等自由基清除剂，降低这些氧化性的自由基对样品造成的影响。
|
合作站点:
合作站点:
合作站点:
合作站点:
|
|
华东华南地区
